Кровоток через сосуды пуповины прерывали путем подтягивания пупочного канатика с помощью тонкого крючка. Пережатие сосудов продолжалось 18 — 40 мин до тех пор, пока частота сердечных сокращений не уменьшалась до 45 — 50 уд/мин.
После этого пережатие сосудов пуповины прекращалось, что приводило к восстановлению кровотока; частота сердечных сокращений возвращалась к норме, как правило, через 2 — 5 мин. Пуповину пережимали у 4 плодов независимо от их числа в помете. Остальные плоды служили контролем.
В течение всего эксперимента у контрольных плодов сохранялась нормальная величина сердечных сокращений. Температуру плодов поддерживали около 37 °С. Операцию по пережатию пуповины производили па 17 — 18-й и 20 — 21-й день беременности.
На 21-й день внутриутробного развития после лапаротомии беременной крысы плоды извлекали из матки путем кесарева сечения, обсушивали и наблюдали в атмосфере комнатного воздуха в течение 40 — 60 мин.
После этого плоды декапитировали, извлекали легкие и мозг и фиксировали их в жидкости Карнуа для последующих гистологических исследований (мозг в целом и правое легкое). Левое легкое использовали для анализа фосфолипидов.
Для окрашивания легочной ткани применяли следующие методы: гематоксилин-эозин; орсеин; метод Маллори; метод Гомори для импрегнации соединительной ткани, а также ПАС-реакцию, в отдельных случаях с предварительной обработкой диастазой.
Для анализа фосфолипидов левое легкое замораживали при — 78 °С, взвешивали и гомогенизировали в 0,9% растворе NaCl. В гомогенате определяли содержание белка по методу Лоури.
Липиды экстрагировали по методу, описанному Bligh и Dyer. Разделение фосфолипидов производили с помощью двумерной тонкослойной хроматографии.
Количество липидов в отдельных фракциях устанавливали по содержанию фосфора. Количество ненасыщенного лецитина определяли по методу, описанному Mason и соавт.
При наблюдении за состоянием плодов, извлеченных через сутки или более после операции по пережатию пуповины, было отмечено, что в поведении и жизнеспособности между контрольными и перенесшими гипоксию плодами имеются существенные различия.
У контрольных животных после короткого периода апноэ устанавливалось ритмичное дыхание. Они быстро переворачивались на живот; начинали кричать, особенно в ответ на тактильные раздражения; проявляли поисковый и сосательный рефлексы. Их кожа имела розовый цвет. Напротив, крысята, перенесшие циркуляторную гипоксию, лежали на боку и не переворачивались.
«Гипоксия плода и новорожденного»,
М.Я.Студиникин