Комплементарнозависимое розеткообразование (Применение трех серологических тестов)

Главная / Туберкулёз у детей и подростков / Обследование ребенка, больного туберкулезом / Комплементарнозависимое розеткообразование (Применение трех серологических тестов)

Применение трех серологических тестов позволило обнаружить антитела у 99,3 % больных с активным процессом. РИГА с фосфатидным антигеном микобактерии туберкулеза. Для стандартизации методики РИГА разработан и выпускается ЛенНИИ вакцин и сывороток эритроцитарный диагностикум с фосфатидным антигеном микобактерии, который значительно упрощает постановку реакции. Препарат предназначен для выявления антифосфатидных антител в сыворотке крови больных туберкулезом.

Для постановки реакции производят последовательное разведение сыворотки крови больного в лунках полистироловых планшет в объеме 0,5 мл в изотоническом растворе NaCl от 1:4 до 1:64. Лиофилизированный эритроцитарный диагностикум растворяют в 5 мл изотонического раствора NaCl для получения 2 % взвеси.

В каждую лунку с разведенной сывороткой добавляют по 0,1 мл диагностикума, планшет встряхивают и ставят в термостат на 1,5 … 2 ч при 37 °С, затем оставляют при комнатной температуре на 18 … 20 ч и оценивают реакцию в зависимости от интенсивности образования «зонтика» агглютинированных эритроцитов от + до + + + +. Диагностическим титром для детей считают положительную реакцию с разведением сыворотки 1:8, для взрослых — 1:16 и выше.

При всех клинических формах туберкулеза у детей выявление антифосфатидных антител наиболее четко соответствует активным фазам (73,1 %) и дает самый большой диапазон различия с затихающим туберкулезным процессом. У больных с нетуберкулезными заболеваниями и у здоровых лиц положительные реакции встречаются значительно реже, чем при туберкулезе (10,9 % и 16,6 %).

Непрямой метод иммунофлюоресценции. В постановке РИФ можно применять принцип непрямого метода по P. Weller и S. Coons. Он предусматривает два этапа реакции: преципитацию на туберкулезных микобактериях антител испытуемой сыворотки и обработку препарата флюоресцирующей сывороткой, иммунной к γ-глобулину человека.

Хорошее свечение в этой реакции выявляют культуры М. tuberculosis Dt/St и М. bovis-8. Для приготовления препаратов используют культуры 8 … 10-дневного роста на среде Сотона, мазки фиксируют 2 ч при температуре 65 °С. На нервом этапе препараты обрабатывают сывороткой больного в разведении 1:2 и 1:4, при этом стекла помещают в термостат во влажной камере на 20 … 30 мин, затем промывают водой и высушивают.

На втором этапе препараты обрабатывают античеловеческой люминесцирующей сывороткой. Затем просматривают в люминесцентном микроскопе. Положительным результатом считают свечение 10 … 15 клеток в поле зрения. В контрольных препаратах, не обработанных сывороткой больного, свечения не должно быть.

Положительные результаты реакция дает у 78,2 % детей, больных активным туберкулезом легких. Несмотря на хорошие результаты РИФ, она трудно воспроизводима, так как требует работы с живыми культурами микобактерии туберкулеза. Разработана новая модификация непрямого метода иммунофлюоресценции.

Полностью исключена работа с патогенными культурами микобактерии туберкулеза. На первом этапе препарат вместо культуры готовится из взвеси стандартного эритроцитарного диагностикума с фосфатидным антигеном микобактерии туберкулеза с последующей его обработкой сывороткой больного и антиглобулиновой флюоресцирующей сывороткой.

Такая модификация значительно упрощает постановку реакции и делает ее доступной для практических лабораторий. Чувствительность реакции при туберкулезе повышается до 82 %. Реакция является высокоспецифичной, частота положительных результатов при нетуберкулезных заболеваниях и у здоровых лиц составляет лишь 8 … 10 % [Степанова Э. А. и др., 1985].

«Туберкулёз у детей и подростков», Е.Н. Янченко

В реакции определяется присутствие в сыворотке крови больных туберкулезом комплементсвязывающих антипротеиновых антител. В качестве антигена используется сухой туберкулин производственных серий, препарат взвешивают и разводят изотоническим раствором NaCl. Инактивированную сыворотку больного разводят от 1:2,5 до 1:160 в объеме 0,5 мл. В каждую пробирку добавляют по 0,5 мл туберкулина в разведении 1:10 и 0,5 мл комплемента (рабочую…

При туберкулезе у детей и подростков часто встречаются изменения других органов и систем. Они могут быть связаны как с локализацией специфического процесса в том или ином органе, так и с функциональными расстройствами, возникающими под действием микобактерии туберкулеза и их токсинов на организм в целом. Отмечают тахикардию, аритмию, приглушение тонов сердца, нередко расширение границ сердечной тупости…

Температурная реакция может сопровождаться симптомами общей интоксикации, хотя и не всегда. Проявлением общей реакции организма на введение туберкулина являются изменения показателей гемограммы, протеинограммы и других тестов. Спустя 30 мин или час после подкожного введения туберкулина отмечается уменьшение абсолютного числа эозинофилов (проба Ф. А. Михайлова), через 24…48 ч могут быть выявлены по сравнению с исходными показателями…

В основе сужения бронхов могут лежать различные причины: разрастание опухолевой ткани, воспалительные изменения, рубцовая деформация, сдавление извне и др. Бронхоскопия позволяет установить локализацию, степень и характер стенозов. Условно различают три степени сужения: I — на 1/2 просвета, II — на 2/3 просвета, II — более чем на 2/3 просвета. При воспалительных изменениях, если сужение вызвано…

Туберкулино-диагностика — это важнейший метод изучения инфицированности микобактериями туберкулеза, а также реактивности инфицированных или вакцинированных людей, основанный на применении туберкулиновых проб. Роль и значение этого метода не уменьшаются с момента получения в 1890 г. Р. Кохом туберкулина. ТуберкулинСтарый туберкулин Коха (АТК — Alt-tuberculinum Koch) представляет собой водно-глицериновую вытяжку туберкулезных культур, полученную из 6…8-недельной культуры микобактерии…

Популярное
Новое Прочее